摘自：衛(wèi)生部出版的《消毒技術(shù)規(guī)范（2002年版）》P72-74
2.1.5.8臭氧水消毒器
2.1.5.8.1 目的
檢測(cè)臭氧水消毒器發(fā)生的臭氧水消毒劑對(duì)物品表面的消毒效果，以驗(yàn)證臭氧水消毒劑對(duì)物品表面消毒的實(shí)用劑量。
臭氧水消毒劑指應(yīng)用臭氧消毒設(shè)備制備的含臭氧的水溶液，并以其作為消毒劑，用于對(duì)物品表面等的消毒。
2.1.5.8.2  試驗(yàn)器材
    (1) 金黃色葡萄球菌( ATCC 6538 )、大腸桿菌( 8099 )、銅綠假單胞菌（ ATCC 15442 ）、白色念珠菌( ATCC 10231 )懸液和脊髓灰質(zhì)炎病毒懸液。
    (2) 染菌載體(10mm×10mm，以布片為代表，必要時(shí)可隨消毒對(duì)象，增用或改用其他載體)。
    (3) 臭氧采樣裝置。
    (4) 細(xì)菌定量殺滅試驗(yàn)用器材與培養(yǎng)基(見(jiàn) 2.1.1.7，2.1.1.9 )。
    (5) 脊髓灰質(zhì)炎病毒滅活試驗(yàn)用試液、培養(yǎng)基和器材(見(jiàn) 2.1.1.10 )。
(6) 溫度與濕度計(jì)。
(7) 500 ml塑料杯。
(8) 水流量計(jì)（1L/min～10L/min）。
(9) 不銹鋼網(wǎng)。
(10) 臭氧濃度測(cè)定用臭氧分析儀和化學(xué)滴定法用試劑、器材等。
2.1.5.8.3 臭氧濃度測(cè)定
臭氧濃度的測(cè)定方法分為化學(xué)滴定法和儀器測(cè)定法。
    儀器測(cè)定法按儀器使用說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行。
（1）通過(guò)式臭氧消毒設(shè)備
測(cè)定水樣流出消毒設(shè)備后臭氧濃度由高到低的衰變曲線(xiàn)。測(cè)定時(shí)，若出水流量可調(diào)，設(shè) 3 個(gè)流量其中應(yīng)包括該設(shè)備的很大流量和很小流量，若出水流量不可調(diào)，則按說(shuō)明書(shū)要求設(shè) 1 個(gè)流量，各流量水樣流出消毒設(shè)備后，即刻測(cè)定水樣中臭氧含量，然后再將水樣放 20℃ 水浴中，設(shè) 5個(gè)～6個(gè)時(shí)間段，分別測(cè)定水樣中臭氧含量，并繪制臭氧濃度衰變曲線(xiàn)。
（2）暴氣式臭氧消毒設(shè)備
測(cè)定一定容量的水體中臭氧濃度由低到高，直到臭氧濃度達(dá)飽和時(shí)的濃度變化曲線(xiàn)。按說(shuō)明書(shū)要求，加入規(guī)定容量的水樣，通入臭氧氣體，設(shè) 5個(gè)～6個(gè)時(shí)間段（應(yīng)測(cè)出臭氧濃度達(dá)飽和時(shí)的很短時(shí)間），分別測(cè)定水樣中臭氧含量，并繪制臭氧濃度變化曲線(xiàn)。
2.1.5.8.4 殺滅微生物試驗(yàn)操作程序
按臭氧設(shè)備制備臭氧水消毒劑的方式分為暴氣式與通過(guò)式兩類(lèi)。
（1）暴氣方式臭氧消毒設(shè)備制備臭氧水消毒劑的殺滅微生物試驗(yàn)
①按 2.1.1.2 所示相關(guān)方法制備金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌、枯草桿菌黑色變種芽孢、白色念珠菌、黑曲霉孢子的菌片。必要時(shí)，可增設(shè)其他試驗(yàn)微生物。   
②有專(zhuān)用容器者，按說(shuō)明書(shū)要求向?qū)Ｓ萌萜鲀?nèi)加入規(guī)定容量的無(wú)菌蒸餾水無(wú)專(zhuān)用容器者，用容量≥3000ml的燒杯，盛裝3000ml無(wú)菌蒸餾水樣，調(diào)水溫至20℃±2℃
若無(wú)專(zhuān)用容器但需在更大容量的水樣中進(jìn)行試驗(yàn)者，示消毒設(shè)備狀況，按使用說(shuō)明書(shū)要求調(diào)整水樣用量，并調(diào)水溫至20℃±2℃。
③將不銹鋼網(wǎng)放盛水容器底部中央，染菌布片放不銹鋼網(wǎng)表面，染菌布片上再蓋一不銹鋼網(wǎng)片。
④連接微孔擴(kuò)散裝置與臭氧氣源出口，開(kāi)啟臭氧消毒設(shè)備，開(kāi)始消毒處理。
⑤待臭氧暴氣浸泡消毒至規(guī)定作用時(shí)間（第一個(gè)作用時(shí)間應(yīng)不少于水中臭氧達(dá)飽和濃度所需時(shí)間），取出樣片，移入含5 ml中和劑溶液的試管中，中和10 min，進(jìn)行活菌計(jì)菌。
⑥試驗(yàn)同時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照用無(wú)臭氧氣體代替臭氧氣體，在水樣體積和暴氣量等相同條件下，將染菌樣片暴氣浸泡至很長(zhǎng)作用時(shí)間，取出樣片，進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。
⑦試驗(yàn)重復(fù)3次。
⑧根據(jù)各組殺滅對(duì)數(shù)值計(jì)算結(jié)果，確定殺滅細(xì)菌繁殖體，真菌或細(xì)菌芽孢的殺滅對(duì)數(shù)值為3所需很低有效濃度和相應(yīng)的作用時(shí)間。
（2）通過(guò)式臭氧消毒設(shè)備制備的臭氧水消毒劑流動(dòng)載體浸泡殺滅微生物試驗(yàn)
①按 2.1.1.2 所示相關(guān)方法制備金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌、枯草桿菌黑色變種芽孢、白色念珠菌、黑曲霉孢子的菌片。必要時(shí)，可增設(shè)其他試驗(yàn)微生物。   
②將臭氧水消毒設(shè)備開(kāi)機(jī)5min，使臭氧水中臭氧含量穩(wěn)定。
③取不銹鋼網(wǎng)放盛水容器底部中央，染菌布片放不銹鋼網(wǎng)表面，染菌布片上再蓋一不銹鋼網(wǎng)片。用臭氧水消毒劑沿容器壁流下，流動(dòng)浸泡消毒至說(shuō)明書(shū)規(guī)定作用時(shí)間，取樣檢驗(yàn)。
④試驗(yàn)同時(shí)設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照組用自來(lái)水代替臭氧水消毒劑，在相同流量下流動(dòng)浸泡至很長(zhǎng)作用時(shí)間。取出樣片，進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。
⑤取本次試驗(yàn)同批的 PBS 和培養(yǎng)基接種培養(yǎng)基培養(yǎng)，作為陰性對(duì)照。
⑥試驗(yàn)重復(fù)3次。
⑦根據(jù)各組殺滅率計(jì)算結(jié)果，確定殺滅細(xì)菌繁殖體、真菌或細(xì)菌芽孢的殺滅對(duì)數(shù)值為3所需很低有效濃度和相應(yīng)的作用時(shí)間。
2.1.5.8.5 脊髓灰質(zhì)炎病毒滅活試驗(yàn)
(1) 按 2.1.1.10.3 所示方法制備脊髓灰質(zhì)炎病毒懸液。若無(wú)特殊要求，用玻片為載體。
(2) 將制備的脊髓灰質(zhì)炎病毒玻片加到無(wú)菌試管中，使帶有病毒的一面向上。
    (3) 將臭氧水消毒設(shè)備開(kāi)機(jī)5min，使臭氧水中臭氧含量穩(wěn)定。
(4) 向含有脊髓灰質(zhì)炎病毒玻片的試管中加入1.0ml的臭氧水消毒劑，浸泡消毒至規(guī)定作用時(shí)間，取出玻片載體，移入含 1ml 細(xì)胞維持液的試管中。振打后，取樣按 2.1.1.10.4 所示方法檢測(cè)殘留脊髓灰質(zhì)炎病毒滴度。
(5)將未消毒的染有脊髓灰質(zhì)炎病毒的玻片，加到1.0ml的無(wú)菌蒸餾水中，浸泡至規(guī)定消毒作用的很長(zhǎng)時(shí)間。取出玻片載體，移入含 1ml 細(xì)胞維持液的試管中。振打后，取樣按 2.1.1.10.4 所示方法檢測(cè)殘留脊髓灰質(zhì)炎病毒滴度，作為陽(yáng)性對(duì)照。
（6）陰性對(duì)照，用不含脊髓灰質(zhì)炎病毒的完全培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照，以觀(guān)察培養(yǎng)基有無(wú)污染，細(xì)胞是否生長(zhǎng)良好。
(7) 試驗(yàn)重復(fù) 3 次。
    (8) 根據(jù)各組的平均病毒感染滴度（TCID₅₀ ），分別計(jì)算其對(duì)病毒的滅活對(duì)數(shù)值。
2.1.5.8.6  評(píng)價(jià)規(guī)定
對(duì)細(xì)菌及其芽孢和真菌，在3次試驗(yàn)中，所設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組的回收菌量在5 × 10⁵cfu/片～5 × 10⁶ cfu/片，陰性對(duì)照無(wú)菌生長(zhǎng)，試驗(yàn)組中每次試驗(yàn)細(xì)菌及其芽孢和真菌的殺滅對(duì)數(shù)值均≥3.00；對(duì)脊髓灰質(zhì)炎病毒，在3次試驗(yàn)中，所設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組，脊髓灰質(zhì)炎病毒滴度達(dá)10⁵ (TCID₅₀)，陰性對(duì)照細(xì)胞無(wú)污染，試驗(yàn)組中每次試驗(yàn)病毒滴度下降4個(gè)對(duì)數(shù)值者，該組作用時(shí)間可作為實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)消毒合格的很短作用時(shí)間。
若陽(yáng)性或陰性對(duì)照組的結(jié)果與上述要求不符，試驗(yàn)作廢，重新進(jìn)行。
2.1.5.8.7  注意事項(xiàng)
對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有懷疑時(shí)，可在試驗(yàn)時(shí)同步進(jìn)行臭氧濃度測(cè)定，以便作進(jìn)一步的分析。
很后，北京同林臭氧發(fā)生器專(zhuān)家指出：臭氧水消毒器（臭氧水機(jī)）不但要做到濃度高，而且要做到穩(wěn)定、無(wú)尾氣、濃度可調(diào)可控。北京同林臭氧水消毒器被廣泛應(yīng)用在果蔬、海鮮的消毒和保鮮；包裝瓶、酒瓶的消毒等，取得了非常好的效果。