肖向禹，吳熠丹，符雪瀅，孔翠瀅，王衡，周沛，張桂紅*（華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，國(guó)家非洲豬瘟區(qū)域?qū)嶒?yàn)室，非洲豬瘟防控技術(shù)研究中心，廣東廣州510642）
 

       非洲豬瘟（African Swine Fever，ASF）是由非洲豬瘟病毒（African Swine Fever Virus，ASFV）引起的急性、烈性和高度接觸的傳染性疾?。?］。2007年以前，ASF在撒哈拉以南國(guó)家流行，隨后一株高度毒力的ASFV被帶到高加索地區(qū)，開(kāi)始在東歐和俄羅斯傳播［2］。2018 年8 月，ASF 在中國(guó)的東北部暴發(fā)，隨后席卷全國(guó)，對(duì)經(jīng)濟(jì)社會(huì)產(chǎn)生巨大影響［3］。ASF被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織設(shè)定為法定報(bào)告的動(dòng)物疫病，而且屬于我國(guó)重點(diǎn)防范的一類動(dòng)物疫情。ASFV是非洲豬瘟相關(guān)病毒科（Asfarviridae）非洲豬瘟病毒屬（Asfivirus）的成員，也是的蟲媒DNA病毒，其基因組為雙鏈DNA，大小為170 kb～190 kb之間，病毒粒子的外形近似六邊形，直徑約200 nm［4］。軟蜱是ASFV的重要傳播媒介，很早在非洲東部和南部的發(fā)現(xiàn)，沒(méi)有攜帶ASFV的軟蜱，由于叮咬攜帶ASFV的病豬，也會(huì)成為ASFV潛在的傳染源，再次叮咬陰性疣豬時(shí)，使其感染ASFV。ASFV在野生豬群中通過(guò)蜱作為中間宿主在豬群傳播［5］。同時(shí)ASFV也可以通過(guò)空氣或附著在ASFV污染物的表面進(jìn)行傳播［6］。ASFV可以引起家豬和野豬特征性出血和發(fā)熱，臨床癥狀表現(xiàn)為發(fā)燒、皮膚發(fā)紺和多臟器廣泛性出血，強(qiáng)毒株感染時(shí)死亡率高達(dá)100%。由于ASFV的對(duì)機(jī)體免疫機(jī)制的影響極為復(fù)雜，基因型多，因此沒(méi)有有效疫苗用于防控［7］。ASFV 作為很具破壞性的病毒之一，對(duì)動(dòng)物健康、國(guó)民經(jīng)濟(jì)和人民生活構(gòu)成巨大威脅。
 

       目前我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)針對(duì)ASFV采取的措施主要是以預(yù)防為主，在豬場(chǎng)原材料和人工等方面嚴(yán)格把控，一切原材料進(jìn)入豬場(chǎng)之前進(jìn)行嚴(yán)格的殺菌和消毒，以控制ASFV 的傳入。消毒劑作為殺滅ASFV常用的主要消毒產(chǎn)品在豬場(chǎng)被廣泛使用。而臭氧作為消毒劑具備以下幾個(gè)特點(diǎn)。首先，臭氧是一種廣譜殺菌劑，可殺滅細(xì)菌繁殖體和芽孢、病毒、真菌等，且臭氧在水中殺菌速度是液氯的3000倍以上。其次，臭氧殺菌速度是急速的，當(dāng)濃度超過(guò)一定閾值后，消毒殺菌甚至可以瞬間完成。并且臭氧利用其強(qiáng)氧化性能消毒，不產(chǎn)生有害生成物，剩余臭氧會(huì)自行分解為氧氣，因而不產(chǎn)生殘余污染［9］。臭氧氣體和臭氧水消毒為臭氧常見(jiàn)的消毒方式，應(yīng)用控制簡(jiǎn)單、方便、經(jīng)濟(jì)。由于臭氧特有的優(yōu)勢(shì)，其在食品處理中有很多附加價(jià)值，如無(wú)須使用化學(xué)藥劑，沒(méi)有化學(xué)副產(chǎn)物，減少成本支出，使用環(huán)境更安全。基于臭氧的這些特點(diǎn)，食品行業(yè)采用高濃度臭氧水進(jìn)行食品殺菌，主要應(yīng)用于員工洗手消毒、食品行業(yè)器械消毒、大小型蔬果處理廠、食品加工業(yè)和定點(diǎn)清潔。因此，為了探究將臭氧消毒應(yīng)用于豬場(chǎng)內(nèi)食品的消毒是否切實(shí)可行，本試驗(yàn)?zāi)M了豬場(chǎng)內(nèi)員工食材消毒場(chǎng)景，初步探究了不同濃度的臭氧水對(duì)ASFV殺滅效果。

1 材料和方法

1.1 材料

ASFV病毒粒子、豬紅細(xì)胞、PAMs細(xì)胞、96孔細(xì)胞培養(yǎng)板、1640培養(yǎng)基、胎牛血清、臭氧水機(jī)：“瑞凈活氧水機(jī)”（DT‐01C、12W）、“杭州陸恒生物”臭氧水濃度檢測(cè)儀M900。

1.2 方法

1.2.1 臭氧水機(jī)不同作用時(shí)間下臭氧水濃度變化啟動(dòng)臭氧水機(jī)，將水槽內(nèi)注滿自來(lái)水，在不同作用時(shí)間后，使用臭氧水濃度檢測(cè)儀測(cè)定臭氧水濃度，探究臭氧水隨時(shí)間變化曲線。

1.2.2 探究震蕩對(duì)臭氧水濃度的影響將3.0 ppm 臭氧水取出裝至50 mL 離心管內(nèi)，漩渦震蕩15 s，使用臭氧水濃度檢測(cè)儀測(cè)定臭氧水濃度，探究臭氧水濃度隨著震蕩時(shí)間變化曲線，探究震蕩是否能夠消除水中溶解的臭氧。

1.2.3 臭氧水殺滅ASFV效果探究

探究不同臭氧水對(duì)ASFV殺滅效果的試驗(yàn)分為三組：試驗(yàn)組，陽(yáng)性對(duì)照組和陰性對(duì)照組。試驗(yàn)組：2.0 ppm、3.5 ppm、5.0 ppm的臭氧水10 mL與病毒懸液（病毒拷貝數(shù)為3.0×104）分別作用2 min、5 min和10 min。病毒陽(yáng)性對(duì)照組：無(wú)菌水10 mL與100 μL的病毒懸液（病毒拷貝數(shù)為3.0×104）分別作用2 min、5 min和10 min。作用結(jié)束后，震蕩去除水中溶解的臭氧，再接種于提前鋪有PAMs細(xì)胞的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，孵育2 h后，置37 ℃二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。病毒陰性對(duì)照組：無(wú)菌水10 mL 震蕩，再接種于提前鋪有PAMs細(xì)胞的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組設(shè)置8 個(gè)重復(fù)，孵育2 h 后，置37 ℃二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。分別向上述三組不同處理實(shí)驗(yàn)組中加入豬紅細(xì)胞，觀察是否存在紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象。以上涉及ASFV活病毒的試驗(yàn)均在華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)開(kāi)展。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 臭氧水機(jī)不同作用時(shí)間下水中臭氧濃度變化臭氧水機(jī)不同作用時(shí)間下水中臭氧濃度變化（方差S2為1.0506）如圖1所示，隨著臭氧水機(jī)的開(kāi)啟，水中臭氧濃度逐漸上升，并于45 min 時(shí)到達(dá)5.2 ppm，45 min后，在臭氧水機(jī)開(kāi)啟的情況下水中臭氧濃度一直保持在5.0 ppm以上。

2.2 震蕩對(duì)臭氧水濃度的影響

震蕩對(duì)臭氧水濃度的影響（方差S2為1.02164）如圖2所示，隨著漩渦震蕩時(shí)間的增加，臭氧水的濃度逐漸降低，并于75 s接近0 ppm，表明震蕩可有效去除水中溶解的臭氧，可用于中止臭氧反應(yīng)試驗(yàn)。

2.3 臭氧水殺滅ASFV 效果探究

臭氧水殺滅ASFV的結(jié)果如表1所示：陰性對(duì)照（空白對(duì)照組）HAD結(jié)果為陰性，表明試驗(yàn)過(guò)程操作嚴(yán)謹(jǐn)，試驗(yàn)無(wú)污染。陽(yáng)性對(duì)照（病毒組）與無(wú)菌水作用2 min、5 min和10 min時(shí)，HAD結(jié)果均為陽(yáng)性，表明病毒活性良好，試驗(yàn)切實(shí)可行。臭氧水試驗(yàn)組，10 mL濃度為2.0 ppm、3.5 ppm、5.0 ppm的臭氧水與100 μL 3.0×104 拷貝數(shù)的ASFV 作用2 min、5 min和10 min時(shí)，HAD結(jié)果均為陰性，表明2.0 ppm、3.5 ppm、5.0 ppm的臭氧水與均100 μL3.0×104 拷貝數(shù)的ASFV作用2 min、5 min和10 min時(shí)，均可完全殺滅病毒。

3 討論

2018年8月，ASFV入侵我國(guó)，隨后政府立即發(fā)布了相關(guān)防控政策，但ASF仍在一年內(nèi)迅速蔓延至中國(guó)大陸各省。到目前為止，ASF疫情在我國(guó)尚未得到完全的控制。ASFV 在豬群中的持續(xù)感染，大量的豬只被撲殺，引起了豬群數(shù)量和生豬產(chǎn)量的劇烈波動(dòng)，導(dǎo)致豬肉價(jià)格的劇烈波動(dòng)，對(duì)我國(guó)生豬產(chǎn)業(yè)和經(jīng)濟(jì)發(fā)展帶來(lái)了挑戰(zhàn)。ASF在我國(guó)的出現(xiàn)和迅速蔓延，表明我國(guó)針對(duì)外來(lái)動(dòng)物疾病的生物安全體系存在薄弱環(huán)節(jié)，因此我們需要提高生物安全意識(shí)，完善豬場(chǎng)生物安全體系［8］。目前我國(guó)豬場(chǎng)生物安全防控的措施主要從三方面入手：第一，建立良好的生物安全屏障；第二，建立良好的消毒和無(wú)害化處理措施；第三，提高豬場(chǎng)工作人員

的生物安全意識(shí)。良好的消毒措施對(duì)于控制ASFV的傳播至關(guān)重要。目前國(guó)內(nèi)豬場(chǎng)主要采取消毒劑的方式對(duì)豬場(chǎng)進(jìn)行消毒，主要以強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、強(qiáng)氧化劑、季銨鹽和鹵素類消毒劑為主，雖然對(duì)病原體有較好的殺滅效果，但大部分消毒劑對(duì)豬和人有一定危害，且對(duì)豬場(chǎng)內(nèi)員工食材并非是較好的消毒方法［10］。臭氧作為消毒劑具有高效性、廣譜性、無(wú)污染等特點(diǎn)?？紤]到臭氧消毒的優(yōu)越性，本試驗(yàn)?zāi)M了豬場(chǎng)內(nèi)員工食材消毒場(chǎng)景，證實(shí)了臭氧水對(duì)ASFV有較好的殺滅效果?？梢?jiàn)，將臭氧水應(yīng)用于豬場(chǎng)內(nèi)員工食材的清洗和消毒是一種較優(yōu)的補(bǔ)充生物安全措施的方式。

4 結(jié)論

試驗(yàn)表明，臭氧水在不同作用時(shí)間下對(duì)ASFV具有較好的殺滅效果，可考慮將臭氧水應(yīng)用于豬場(chǎng)內(nèi)員工食材的清洗和消毒。

參考文獻(xiàn)：

［1］ SANCHEZ‐CORDON P J，MONTOYA M，REIS A L，et al．African swine fever：A re‐emerging viral disease threatening theglobal pig industry［J］.Veterinary Journal，2018，233：41‐48．

［2］ CWYNAR P，STOJKOV J，WLAZLAK K. African swine feverstatus in europe［J］.Viruses，2019，11（4）：310.

［3］ GE S，LI J，F(xiàn)AN X，et al. Molecular Characterization of AfricanSwine Fever Virus， China， 2018 ［J］.Emerging InfectiousDiseases，2018，24（11）：2131‐2133.

［4］ GALINDO I，ALONSO C． African swine fever virus：A review

［J］.Viruses，2017，9（5）：103.

［5］ JORI F，VIAL L，PENRITH M L，et al．Review of the sylvaticcycle of African swine fever in sub‐Saharan Africa and the Indianocean［J］.Virus Research，2013，173（1）：212‐227.

［6］ BOINAS F S，WILSON A J，HUTCHINGS G H，et al． Thepersistence of African swine fever virus in field ‐ infectedOrnithodoros erraticus during the ASF endemic period in Portugal［J］.PLoS One，2011，6（5）：e20383.

［7］ DIXON L K，STAHL K，JORI F，et al． African swine feverepidemiology and control ［J］. Annual Review of AnimalBiosciences，2020，8（1）：221‐246.

［8］ LU G，CAI S，ZHANG G． African swine fever in China oneyear on［J］.Veterinary Record，，2019，185（17）：542.

［9］ 臭氧殺菌特點(diǎn)與產(chǎn)生方法比較［J］. 食品安全導(dǎo)刊，2008（01）：58‐59.

［10］ 孫剛. 論養(yǎng)豬場(chǎng)消毒的方法［J］. 農(nóng)民致富之友，2018（02）：229.

相關(guān)文章：養(yǎng)豬場(chǎng)用臭氧發(fā)生器對(duì)物料、飼料消毒解決方案
推薦產(chǎn)品：3S-H冷干制氧機(jī)臭氧一體臭氧發(fā)生器